Les protéines sont un concept important dans la vie, car la nourriture est pleine de protéines et le corps humain a besoin de beaucoup de protéines chaque jour pour rester en vie. Avec les progrès de la science et de la technologie modernes, les recherches sur les protéines deviennent de plus en plus approfondies et des résultats de recherche sur les protéines microscopiques ont émergé. Par exemple, l'étude de l'interaction entre les protéines est un sujet relativement important. Voyons ce qu'est l'interaction entre les protéines. L'interaction protéine-protéine fait référence au processus par lequel deux ou plusieurs molécules de protéines forment un complexe protéique par le biais de liaisons non covalentes.Les interactions protéine-protéine constituent un élément majeur du réseau de réactions biochimiques cellulaires et sont d'une grande importance dans la régulation des cellules et de leurs signaux. Les études d'interaction protéique peuvent être divisées en deux catégories selon l'objectif expérimental : l'une consiste à vérifier s'il existe une interaction entre deux protéines, et l'autre consiste à rechercher des protéines en interaction avec une protéine d'intérêt.
(1) La nature de la protéine sonde et la source de la protéine en interaction : La nature de la protéine sonde : il peut s'agir d'une protéine pleine longueur, d'un domaine lié à l'interaction ou même d'un fragment biologiquement actif plus petit synthétisé par synthèse chimique. Sources de protéines en interaction : les lignées cellulaires connues pour exprimer de manière endogène la protéine sonde sont des matériaux expérimentaux idéaux pour rechercher des protéines qui interagissent avec elle. (2) Préparation de lysats cellulaires : Les facteurs clés pour la préparation réussie d'extraits cellulaires bruts comprennent : la méthode de lyse cellulaire ; le contrôle du pH ; la température ; et l'évitement de la dégradation des protéines. Toutes ces opérations nécessitent de multiples répétitions lors d’expériences préliminaires pour optimiser les conditions de lyse cellulaire. Il n’est parfois pas nécessaire de perturber les cellules pour extraire des protéines recombinantes. Par exemple, de nombreuses lignées cellulaires de mammifères à forte expression (en particulier les cellules ovariennes de hamster chinois, cellules CHO) et les lignées cellulaires de levure ont été conçues pour sécréter des protéines recombinantes, ce qui permet de purifier les protéines recombinantes directement à partir du milieu conditionné cellulaire et du filtrat de culture. Il est important de concentrer de grands volumes de milieux conditionnés par des cellules le plus rapidement possible pour obtenir un « environnement sans protéase » à l’aide de ces méthodes. |
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