Méthode de dosage de la lactate déshydrogénase

Nous savons qu'il existe différentes enzymes dans la vie réelle. Ces enzymes peuvent agir seules ou interagir entre elles et avoir un grand impact sur notre corps humain. Cependant, je pense que tout le monde n'est pas très familier avec la méthode de détermination des enzymes. Différentes enzymes ont des méthodes de détermination différentes, et les méthodes sont également différentes. De nos jours, la méthode de détermination de la lactate déshydrogénase est devenue un sujet de recherche pour de nombreuses personnes. Alors, comment la déterminer ? Découvrons la méthode de détermination de la lactate déshydrogénase.

méthode:

Avant de commencer l'expérience, veuillez préparer tous les réactifs à l'avance. Lors de la dilution des réactifs ou des échantillons, ils doivent être mélangés uniformément et éviter la formation de mousse pendant le mélange. Une courbe standard doit être préparée pour chaque test. Si la concentration de l'échantillon est trop élevée, diluez-la avec un diluant d'échantillon pour que l'échantillon corresponde à la plage de détection du kit.

1. Ajout d'échantillon : installez des puits vierges, des puits standard et des puits pour les échantillons à tester. Ajoutez 100 µl de diluant d'échantillon dans le puits à blanc et 100 µl d'échantillon standard ou d'essai dans les puits restants. Veillez à ce qu'il n'y ait pas de bulles. Ajoutez l'échantillon au fond du puits de la plaque ELISA, essayez de ne pas toucher la paroi du puits, agitez doucement pour mélanger, couvrez ou recouvrez la plaque ELISA et faites réagir à 37 °C pendant 120 minutes.

Afin de garantir la validité des résultats expérimentaux, veuillez utiliser une nouvelle solution standard pour chaque expérience.

2. Jetez le liquide, essorez et ne lavez pas. Ajoutez 100 μl de solution de travail d'anticorps marqué à la biotine dans chaque puits (préparez 1 μl d'anticorps marqué à la biotine avec 99 μl de diluant d'anticorps marqué à la biotine, mélangez doucement et préparez dans l'heure qui précède l'utilisation) et incubez à 37 °C pendant 60 minutes.

3. Après 60 minutes d'incubation, jetez le liquide dans les puits, essorez, lavez la plaque 3 fois, en la trempant pendant 1 à 2 minutes à chaque fois, 350 μl/puits, et essorez.

4. Ajoutez 100 μl de solution de travail d'avidine marquée à la peroxydase de raifort (identique à la solution de travail d'anticorps marqué à la biotine) dans chaque puits et incubez à 37 °C pendant 60 minutes.

5. Après 60 minutes d'incubation, jetez le liquide dans les puits, essorez, lavez la plaque 5 fois, en la trempant pendant 1 à 2 minutes à chaque fois, 350 μl/puits, et essorez.

6. Ajoutez 90 μl de solution de substrat à chaque puits en séquence et développez la couleur à 37 °C dans l'obscurité (dans les 30 minutes, les 3 à 4 premiers puits de l'étalon auront un gradient bleu clair visible à l'œil nu, tandis que le gradient dans les 3 à 4 derniers puits n'est pas évident et le processus peut être terminé).

7. Ajoutez 50 µl de solution d’arrêt dans chaque puits pour terminer la réaction (la couleur bleue devient immédiatement jaune). L’ordre d’ajout de la solution d’arrêt doit être aussi similaire que possible à l’ordre d’ajout de la solution de substrat. Afin de garantir l'exactitude des résultats expérimentaux, la solution d'arrêt doit être ajoutée dès que possible après l'expiration du temps de réaction du substrat.

8. Utilisez un test immuno-enzymatique (ELISA) pour mesurer la densité optique (valeur OD) de chaque puits en séquence à une longueur d'onde de 450 nm. Effectuer le test dans les 15 minutes suivant l’ajout de la solution d’arrêt.

Le contenu ci-dessus nous présente la méthode de détermination de la lactate déshydrogénase. Je pense que ce contenu peut susciter l'intérêt de tout le monde. Je pense que tout le monde peut déterminer efficacement, rapidement et directement la lactate déshydrogénase. Peut-être êtes-vous aussi un passionné de recherche, alors dépêchez-vous et pratiquez-le !